脂質體2000轉染細胞實驗材料及操作步驟

 

1、Vero細胞

 

2、轉染級質粒

 

3、DMEM細胞培養液：無血清DMEM、10%血清DMEM

 

4、脂質體2000

 

5、6孔細胞培養板

 

二、脂質體2000轉染細胞實驗操作步驟：（以6孔板為例予以說明）

 

1、細胞鋪板：轉染前一天進行鋪板，第二天待細胞長成單層即可進行轉染。（Vero細胞按一傳三的比例進行傳代，一般10~12h即可。）

 

2、溶液1：240ul無血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell（總體積250ul）（溫育5min）

 

3、溶液2：無血清DMEM+4ug質粒perwell（總體積250ul）（根據質粒濃度確定DMEM的體積，但保證總體積為250ul）

 

4、將溶液1與溶液2混合，室溫下置20min。

 

5、與此同時，將6孔板中的細胞用無血清DMEM沖洗細胞兩遍后，加入1.5ml無血清培養基。

 

6、將溶液1與溶液2的混合液逐滴加入孔中，搖動培養板，輕輕混勻。在37℃、5％的CO2培養箱中培養5~6小時。

 

7、6小時后，更換10%血清的DMEM，在37℃、5％的CO2培養箱中培養48~72h檢測轉染水平。